一些吖啶酯或者吖啶磺酰胺中都含有NHS基團(tuán)，該基團(tuán)不參與化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，但是它是吖啶酯能直接標(biāo)記和交聯(lián)蛋白質(zhì)、抗體或酶的關(guān)鍵基團(tuán)，是可以與胺反應(yīng)的交聯(lián)劑，在吖啶酯、熒光素以及其它生物分子探針中都應(yīng)用普遍。

吖啶酯NHS酯標(biāo)記蛋白

吖啶酯中NHS酯的結(jié)構(gòu)

NHS酯指的是N-羥基琥珀酰亞胺（或N-羥基丁二酰亞胺）中的羥基脫去氫，與吖啶酯中羧基脫去羥基后的羰基相連而形成的特殊酯（-COO-N-）。這種酯可以與蛋白上的伯胺（一級(jí)氨基）反應(yīng)，NHS酯中羰基相連的C-O鍵斷裂脫去NHS基團(tuán)，然后羰基與蛋白氨基相連形成-CONH-酰胺鍵（即蛋白中羧氨脫水縮合形成的肽鍵），從而與蛋白質(zhì)連接達(dá)到標(biāo)記蛋白的目的。后續(xù)通過(guò)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，以檢測(cè)被吖啶酯標(biāo)記的蛋白。

NHS酯的優(yōu)勢(shì)

與伯胺（-NH2）反應(yīng)的化學(xué)基團(tuán)有很多，也有一些吖啶酯以其它的方式來(lái)標(biāo)記蛋白或者多肽，但是NHS酯更加通用和普遍。伯胺存在與每個(gè)多肽鏈或蛋白的N-端和賴(lài)氨酸（Lys，K）氨基酸殘基的側(cè)鏈中，即大多數(shù)蛋白都可被NHS酯標(biāo)記。這些伯胺在生理 pH 下帶正電； 因此，它們主要發(fā)生在天然蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)的外表面上，很容易與引入水性介質(zhì)中的結(jié)合試劑發(fā)生反應(yīng)。此外，在典型的生物學(xué)或蛋白質(zhì)樣品的化學(xué)官能基團(tuán)中，伯胺尤為具有親核性，易與幾個(gè)反應(yīng)性基團(tuán)靶向結(jié)合，如NHS酯、異硫氰酸酯以及有些吖啶酯中用的碳二亞胺等。

吖啶酯NHS酯使用注意

NHS酯水解與伯胺反應(yīng)產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)，水解速率隨pH增加而增加，所以低濃度蛋白記率會(huì)下降，所以吖啶酯標(biāo)記蛋白時(shí)優(yōu)先在生理至弱堿性環(huán)境pH（7.2-9）下完成。緩沖液可用磷酸鹽、碳酸鹽、HEPES或硼酸鹽緩沖液，含伯胺的Tris緩沖液會(huì)競(jìng)爭(zhēng)而不相容，標(biāo)記步驟結(jié)束可用Tris或甘氨酸緩沖液猝滅。德晟是化學(xué)發(fā)光試劑廠家，可提供含NHS及其它交聯(lián)結(jié)構(gòu)的吖啶酯及相關(guān)緩沖劑。