化學(xué)發(fā)光底物吖啶酯可以直接標(biāo)記蛋白、抗體、核酸等,不同的吖啶酯其標(biāo)記方法也有差異,大致的標(biāo)記方法類型將在本文作簡(jiǎn)介。
按照標(biāo)記物的應(yīng)用可以分為化學(xué)標(biāo)記和生物標(biāo)記;標(biāo)記的對(duì)象可以是小分子物質(zhì),如甾體激素、藥物等,也可以是大分子物質(zhì),如蛋白質(zhì)、抗體、抗原、核酸以及某些配基、和載體;標(biāo)記的過(guò)程可以是直接偶聯(lián)(如碳二亞胺縮合)或間接偶聯(lián)(如琥珀酰亞胺活化)。
吖啶酯發(fā)光底物
碳二亞胺(EDC)縮合法:
此法可用于蛋白質(zhì)分子中游離羧基或氨基的標(biāo)記,常用縮合劑有EDC、DCC等。5 號(hào)為吖啶酯NSP-SA為含羧酸基團(tuán)的吖啶酰胺,需要加入縮合劑 EDCI 等,才能與含胺基的蛋白發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)。
重氮鹽偶聯(lián)法(重氮化):
此法簡(jiǎn)易、成本低、重復(fù)性好,但不適用于脂肪伯氨基發(fā)光劑,因其生產(chǎn)的重氮鹽不穩(wěn)定,且異魯米諾衍生物ABEI等伯伯胺基位于側(cè)鏈的也不適用。
琥珀酸酐法(環(huán)內(nèi)酸酐法):
此法沒(méi)有雙功能交聯(lián)劑的不良反應(yīng),能實(shí)現(xiàn)標(biāo)記物和蛋白質(zhì)分子間的單向定量縮合,標(biāo)記效率高,商品化試劑供應(yīng)成熟。我們含有NHS活化基團(tuán)的吖啶酯( 1~4 號(hào))都屬于這一類,能與抗體、蛋白的胺基進(jìn)行偶聯(lián),直接標(biāo)記。
還有異魯米諾常用的異硫氰酸酯衍生物法,以及過(guò)碘酸鹽氧化法、戊二醛法、O-(羧甲基)羥胺法、混合酸酐法,但由于或多或少的使用限制,不去前幾種廣泛。
一般來(lái)說(shuō)魯米諾等酶促化學(xué)發(fā)光底物通常不直接標(biāo)記,魯米諾氨基發(fā)生取代后發(fā)光性能受到顯著影響(異魯米諾則可以改善),所以通常采用催化的酶(如HRP、POD、GOD)和/或協(xié)同因子(如ATP、輔酶NAD等)來(lái)標(biāo)記抗體或抗原。但是吖啶酯的優(yōu)勢(shì)是可以連接帶有能夠標(biāo)記的基團(tuán),可直接標(biāo)記抗體或核酸,發(fā)光性能幾乎無(wú)影響。
綜上所述,德晟的六種吖啶酯除了抗水解性、親水性的不同外,其標(biāo)記方法也是有差異的,大家可以根據(jù)標(biāo)記的蛋白、抗體類型作選擇。