吖啶酯標記蛋白效率計算方法
1,取100μL 待測樣品,稀釋至Abs280在0.1~1.5之間;
2,向1中加入少量鹽酸,調(diào)整至pH=1~2,使其形成具有黃色特征的鹽溶液,吸收峰在367nm;
3,分別測試待測樣品的Abs280nm 和Abs367nm ;
4,Equation1: 吖啶酯濃度(mol/L)=Abs367/14650 ;
5,校正蛋白Abs280數(shù)值;
Equation2: Abs280(校正后) = Abs280- (Abs367×0.17);
6,準備1mg/mL未標記的蛋白溶液(e.g. 50ug 蛋白加入50μL 標記緩沖液),取出10μL 并補加490μL ddH2O (稀釋50倍)。讀取Abs280nm ,并乘以稀釋倍數(shù)。
7,計算蛋白質(zhì)量濃度:
8,計算F/P摩爾比