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吖啶酯在標記核酸上的用途

發(fā)表時間:2020-09-27

,黃色粉末,CAS號:194357-64-7,是一種重要的化學發(fā)光試劑,的化學發(fā)光量子產(chǎn)率比魯米諾高,而且吖啶酯標記條件溫和,標記率高,標記后不影響分離。除此之外,吖啶酯的化學發(fā)光過程反應迅速,本底低,在氫氧化鈉和過氧化氫的存在下即可發(fā)光。在氧化反應過程中,結(jié)合物被分解,不影響游離吖啶酯的發(fā)光;另外,吖啶酯類化學發(fā)光試劑具有較好的穩(wěn)定性,易于儲存。 

吖啶酯除了在免疫測定中的應用之外,還可以標記寡核苷酸片段探針應用于基因測定或微生物測定。吖啶酯化合物很適合于標記DNA鏈以制造化學發(fā)光DNA探針?,F(xiàn)代醫(yī)學研究成果表明,許多疾病如癌癥和遺傳疾病的發(fā)生都與DNA的突變有關(guān),且許多傳染性疾病是由環(huán)境中的病毒、病菌或寄生蟲引起的,對病毒特定序列DNA的分析有利于疫情的控制。對DNA序列以及其鏈中堿基突變的檢測在基因篩選、遺傳疾病早期診斷和治療、病原基因測定方面具有十分深遠的意義。

在核酸雜交分析中,制備特異性強、靈敏度高的標記探針是核酸雜交分析成功的關(guān)鍵,吖啶酯衍生物可以直接標記在核酸探針上,不需催化劑且發(fā)光量子產(chǎn)率不受影響;另外,在一定條件下,未雜交的單鏈DNA上標記的吖啶酯被水解破壞,只有雜交形成的雙鏈保護的吖啶酯才能產(chǎn)生化學發(fā)光,不需分離即可監(jiān)測整個雜交過程。

一種吖啶酯標記核酸的方法,所述方法包括以下步驟:

(1) DNA探針5’端、3’端保護;

(2) 吖啶酯標記:25mM NHS吖啶酯溶解于DMSO中,配置1M HEPES緩沖液(PH=8.0) ,按照摩爾比核酸探針:NHS吖啶酯=1:5的條件,加入到HEPES緩沖液中,37℃反應1h;

(3) HPLC純化。所述步驟(1) 中DNA探針5’端、3’端保護具體包括:采用三氟硫代乙酸S-乙酯,對5’端-NH 2進行保護;采用三氟硫代乙酸S-乙酯,對3’端-NH 2 進行保護。

德晟科技在12年就一直在研發(fā)化學發(fā)光試劑,研制成功后投入市場得到了客戶的普遍認同。研發(fā)生產(chǎn)的吖啶酯有6種不同基團的產(chǎn)品,化學發(fā)光試劑除了吖啶酯還有魯米諾、異魯米諾。吖啶酯系列的發(fā)光效率較高,屬于直接發(fā)光。


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