能夠阻止血液凝固的化學(xué)試劑或物質(zhì),稱為抗凝劑或抗凝物質(zhì),如天然抗凝劑(肝素,水蛭素等)、Ca2+鰲合劑(檸檬酸鈉,氟化鉀)。一般常用的抗凝劑有、乙二胺四乙酸鹽(EDTA鹽)、枸櫞酸鹽、草酸鹽等4種, 實(shí)際應(yīng)用中要根據(jù)不同的需要進(jìn)行選擇,才能獲得理想的效果。下面德晟整理了它們的應(yīng)用特點(diǎn)分述如下:
一、肝素
肝素是用于血液化學(xué)成分檢測的首選抗凝劑。肝素是一種含有硫酸基團(tuán)的粘多糖,是分散相物質(zhì)平均分子質(zhì)量為15000。其抗凝原理主要是通過與抗凝血酶Ⅲ結(jié)合引起抗凝血酶Ⅲ構(gòu)型發(fā)生變化,加速凝血酶-凝血酶復(fù)合體形成而產(chǎn)生抗凝作用。此外,肝素還能借助血漿輔助因子(肝素輔助因子Ⅱ)來抑制凝血酶。常用肝素抗凝劑是肝素的鈉、鉀、鋰、銨鹽,其中以肝素鋰最好,但其價(jià)格較貴,鈉、鉀鹽會(huì)增加血液中的鈉、鉀含量,銨鹽會(huì)增加尿素氮的含量。通常用肝素抗凝的劑量為10.0~12.5 IU/ml血液。
肝素對(duì)血液成分干擾較少,不影響紅細(xì)胞體積,不引起溶血,適用于做紅細(xì)胞滲透性試驗(yàn)、血?dú)?、血漿滲透量、紅細(xì)胞壓積及普通生化測定。但肝素具有抗凝血酶作用,不適合做血凝試驗(yàn)。另外,肝素過量可引起白細(xì)胞聚集和血小板減少,所以不適合做白細(xì)胞分類和血小板計(jì)數(shù),更不能用于止血檢驗(yàn)。此外,肝素抗凝血不能用于制作血涂片,因?yàn)?/span>Wright染色后出現(xiàn)深藍(lán)色背景,影響顯微鏡減產(chǎn)。肝素抗凝血應(yīng)于短時(shí)間內(nèi)使用,否則放置過久血液又可凝固。
二、乙二胺四乙酸鹽(EDTA鹽)
EDTA能與血液中Ca2+結(jié)合成螯合物,凝血過程被阻斷,血液不能發(fā)生凝固。EDTA鹽有鉀、鈉、鋰鹽,國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)推薦使用的是EDTA-K2,其溶解度最高,抗凝速度最快。EDTA鹽通常配成質(zhì)量分?jǐn)?shù)是15%的水溶液,每ml血液加1.2mgEDTA,即每5ml血液加0.04ml 15%EDTA溶液。EDTA鹽可在100℃下干燥,抗凝作用不變。
此抗凝劑不影響白細(xì)胞計(jì)數(shù)及大小,對(duì)紅細(xì)胞形態(tài)影響最小,并且可以抑制血小板的聚集,適用于一般血液學(xué)檢測。但如果抗凝劑濃度過高,滲透壓上升,會(huì)造成細(xì)胞皺縮。EDTA溶液pH與鹽類關(guān)系較大,低pH可使細(xì)胞膨脹。EDTA-K2可使紅細(xì)胞體積輕度膨脹,采血后短時(shí)間內(nèi)平均血小板體積非常不穩(wěn)定半小時(shí)后趨于穩(wěn)定。EDTA-K2使 Ca2+、Mg2+下降,同時(shí)使肌酸激酶、堿性磷酸酶降低,EDTA-K2的最佳濃度為1.5mg/ml血液,如果血少,中性粒細(xì)胞會(huì)腫脹分葉消失,血小板會(huì)腫脹、崩解,產(chǎn)生正常血小板的碎片,使分析結(jié)果產(chǎn)生錯(cuò)誤。EDTA由于能抑制或干涉纖維蛋白凝塊形成時(shí)纖維蛋白單體的聚合,不適于血凝和血小板功能檢測,也不適用于鈣、鉀、鈉及含氮物質(zhì)的測定。此外EDTA能影響某些酶的活性和抑制紅斑狼瘡因子,故不適合制作組化染色和檢查紅斑狼瘡細(xì)胞的血涂片。
三、枸櫞酸鹽
枸櫞酸鹽主要是枸櫞酸鈉,其抗凝原理是能與血液中的Ca2+結(jié)合形成螯合物,使Ca2+失去凝血功能,凝血過程被阻斷,從而阻止血液凝固。枸櫞酸鈉有Na3C6H5O7·2H2O和2Na3C6H5O7·11H2O兩種晶體,通常用前者配成3.8%或3.2%的水溶液,與血液按照1:9體積混合。
大部分凝血試驗(yàn)都可用枸櫞酸鈉抗凝,它有助于Ⅴ因子和Ⅷ因子的穩(wěn)定,并且對(duì)平均血小板體積及其他凝血因子影響較小,可用于血小板功能分析。枸櫞酸鈉細(xì)胞毒性較小,也是輸血中血液保養(yǎng)液的成分之一。但是,枸櫞酸鈉6mg才能抗凝1ml血液,堿性強(qiáng),不適用于血液化驗(yàn)和生化測驗(yàn)。
四、草酸鹽
草酸鹽也是常用的抗凝劑,優(yōu)點(diǎn)是溶解度大,其作用原理是溶解后解離的草酸根與標(biāo)本中的Ca2+形成草酸鈣沉淀,使Ca2+失去凝血功能,凝血過程被阻斷。常用的草酸鹽抗凝劑種類有草酸鈉、草酸鉀和草酸銨,草酸鈉的常用濃度為O.1 mol/L,與血液按1:9比例使用。但是高濃度k+或Na+易使血細(xì)胞脫水皺縮,而草酸銨則可使血細(xì)胞膨脹,故測定血細(xì)胞比容時(shí)用草酸銨與草酸鉀或草酸鈉兩者適當(dāng)比例混合的抗凝劑,恰好不影響紅細(xì)胞的形態(tài)和體積。常用于血液生化測定,但不適用于K+、Ca 2+的測定。由于生成草酸鈣沉淀,紅細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)鋸齒狀,白細(xì)胞出現(xiàn)空泡,淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞會(huì)變形,不宜做血片檢查。草酸鹽可使血小板聚集,并影響白細(xì)胞形態(tài),不能用于白細(xì)胞和血小板分類計(jì)數(shù)。
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