吖啶酯是一種非常有優(yōu)勢的化學(xué)發(fā)光標記物，它的穩(wěn)定性，活性和敏感性超過了那些放射性同位素。所以在使用吖啶酯的時候，需要先了解一些關(guān)于它的相關(guān)信息。下面是德晟整理出來關(guān)于吖啶酯的問題僅供大家參考。

1. 吖啶酯在DMF中的溶解度MAX多少?

答：吖啶酯用DMF高溶解的濃度：4mM

2. 吖啶酯避光的要求嚴格嗎？

答： 發(fā)光標記物在光照條件下有可能部分分解，以致影響發(fā)光效果。吖啶酯的實驗操作和儲存建議避光條件下處理，目前暫時沒有具體的研究數(shù)據(jù)。

3. 吖啶酯在什么環(huán)境下穩(wěn)定和不穩(wěn)定？

 答：穩(wěn)定：在酸性溶液中(pH<4.8)都很穩(wěn)定，與蛋白質(zhì)偶聯(lián)物在室溫下保存4周，其光量子產(chǎn)率不降低，凍干品在-20℃下，可以保存一年以上。

不穩(wěn)定：吖啶酯在堿性和氧化環(huán)境下均不穩(wěn)定，易分解。另外，發(fā)光標記物在光照條件下有可能部分分解，以致影響發(fā)光效果。

4. 吖啶酯除了DMF還可以用什么溶劑來溶解?

答：除了DMF，也可以用無水DMSO等非質(zhì)子性溶劑來溶解。

5. 吖啶酯的溶劑有什么要求?

答：標記前：由于吖啶酯末端羧基經(jīng)NHS活化，較為活潑，請用非質(zhì)子性的干燥無水溶劑來溶解；

標記后：標記后吖啶酯與被標記物之間以酰胺鍵或者酯鍵等形式存在，質(zhì)子性溶劑基本沒有太大影響；吖啶酯本身活性位點在堿性和氧化環(huán)境下不穩(wěn)定，此時應(yīng)根據(jù)被標記物的穩(wěn)定性配制相應(yīng)的非強堿性非氧化的體系中處理。

6. 吖啶酯標記后如何分離純化?

答： 吖啶酯標記蛋白等大分子化合物建議用G25脫鹽柱分離；吖啶酯標記小分子化合物建議用柱層析分離。

7. 吖啶酯發(fā)光時間短暫該使用什么采集數(shù)據(jù)？

答：吖啶酯發(fā)光過程是十分短暫（整個過程的發(fā)生小于2秒），觸發(fā)方案必須增加內(nèi)部光度計和光子探測器；另外，本產(chǎn)品可以使用配備自動進樣器的多功能酶標儀進行發(fā)光數(shù)據(jù)采集，較大限度降低加樣時間對采集信號的影響。

8. 吖啶酯DMAE-NHS的熱穩(wěn)定性

吖啶酯-DMAE-NHS的熱穩(wěn)定性隨pH值增大和溫度升高而降低。室溫下，DMAE-NHS在pH為5.8、7.0、8.0的PB緩沖液中均較穩(wěn)定。16天后，發(fā)光活性分別降低1.6%、3.6%和8.3%。在37℃下，DMAE-NHS在pH為5.8、7.0和8.0的PB緩沖液中，16天后發(fā)光活性分別降低8.9%、22%和42%。DMAE-NHS在PB緩沖液中的發(fā)光活性隨時間而降低的原因是因為發(fā)生水解，在堿性環(huán)境中有利于水解，升高溫度也有利于水解，即DMAE-NHS的水解速度隨溶液pH值增大和溫度升高而加快。

9. 化學(xué)發(fā)光檢測性能的幾個重要的磁微粒參數(shù)

盡管微球通常是均一分散的，能在CLIA分析儀中保持懸浮狀態(tài)，但如果未在分析儀中充分攪拌，粒徑較大的微球仍可能發(fā)生沉降。較小粒徑的微球具有更高的比表面積，可提高蛋白負載率，從而增強檢測靈敏度。但粒徑較小的微球需要的分離時間也更久。鑒于上述原因，CLIA檢測常使用的是約1-2 μm的中型微球，因為它們恰好是粒徑適中的方案。