電泳是用瓊脂糖作為介質(zhì)的一種電泳方法,其兼具“分子篩”和“電泳的雙重作用。
瓊脂糖(Agarose)是一種線性多糖聚合物,是從紅色海藻產(chǎn)物瓊脂中提取而來(lái)的,當(dāng)瓊脂糖溶液加熱到沸點(diǎn)后冷卻凝固便會(huì)形成良好的電泳介質(zhì),其密度是由瓊脂糖的濃度決定的。
經(jīng)過(guò)化學(xué)修飾的低熔點(diǎn)的瓊脂糖,在結(jié)構(gòu)上比較脆弱,因此在較低的溫度下便會(huì)熔化,可用于核酸片段的電泳檢測(cè)。
瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)的主要是核酸的完整性和大小,只要核酸不是太小或者太大(超出電泳分離范圍),該方法的可信度非常高。
核酸會(huì)根據(jù)pH不同帶有不同電荷,在電場(chǎng)中受力大小不同,因此跑的速度不同,瓊脂糖凝膠電泳即根據(jù)這個(gè)原理對(duì)核酸進(jìn)行區(qū)分。
核酸分子在pH高于其等電點(diǎn)的溶液中帶負(fù)電荷,在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)。由于核酸的戊糖-磷酸骨架在結(jié)構(gòu)上具有重復(fù)性,長(zhǎng)度相同的核酸鏈幾乎具有等量的凈電荷,因此它們能以同樣的速率向正極方向移動(dòng)。
此外,含有瓊脂糖的凝膠具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),物質(zhì)分子通過(guò)時(shí)會(huì)受到阻力,大分子物質(zhì)在涌動(dòng)時(shí)受到的阻力大,因此在瓊脂糖凝膠電泳中,帶電顆粒的分離不僅取決于凈電荷的性質(zhì)和數(shù)量,而且還取決于分子大小,這就大大提高了分辨能力。
在同樣電場(chǎng)的強(qiáng)度下,核酸分子的遷移速度取決于核酸分子本身的大小和構(gòu)型以及瓊脂糖凝膠的濃度,簡(jiǎn)而言之,分子量較大的核酸遷移速度較慢,分子量較小的核酸遷移速度較快,這就是應(yīng)用凝膠電泳技術(shù)分離核酸片段的基本原理。
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