蘋果酸脫氫酶(MDH)普遍存在于動物,植物,細(xì)菌等各種生物體中,是生物糖代謝的關(guān)鍵酶之一,能催化蘋果酸與草酰乙酸之間的可逆轉(zhuǎn)換。MDHs在細(xì)胞的多種生理活動中起著重要的作用,包括線粒體的能量代謝以及植物的活性氧代謝等。
蘋果酸脫氫酶的生化特性
最適pH值和最適溫度
MDHs的最適pH值偏堿性,約在8.0左右,如鏈霉菌和大腸桿菌的MDH(EcMDH)都在pH值8.1的時候酶活性最高。MDHs的最適反應(yīng)溫度為40~65℃。如枯草桿菌MDH和豬心肌MDH的最適溫度約50℃,嗜熱脂肪芽孢桿菌(BMDH)在65℃有較好的穩(wěn)定性。在溫度趨向兩極的情況下,大多數(shù)種屬的MDHs活力不高,但來自嗜寒細(xì)菌的MDH(AaMDH)在4℃左右仍然保持較高的活性,嗜熱細(xì)菌的MDH在90℃仍然可以保持1h左右的活力,這種差異可能是由于活性位點某種殘基的偏愛、底物和輔因子電荷的分布以及亞基間離子對的相互作用等原因造成的。
熱穩(wěn)定性
EcMDH和枯草桿菌MDH的熱穩(wěn)定性較差。嗜熱脂肪芽孢桿菌BsMDH在高溫下相當(dāng)穩(wěn)定。嗜寒細(xì)菌AaMDH不耐熱,推測與氫鍵數(shù)目、脯氨酸或甘氨酶分子的數(shù)量、位置、及它們的相互作用有關(guān)。在低溫環(huán)境下,甘油是維持MDHs活性的最好穩(wěn)定劑,而環(huán)多醇和山梨醇能在高溫下維持MDHs的活性。這種穩(wěn)定原理可能是羥基基團和酶分子的相互作用或是醇類減少了介質(zhì)的介電常數(shù)而加強了酶分子的疏水作用,使酶蛋受水分子的影響減少。
金屬離子的影響
帶各種電荷的離子對MDHs的活性及蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性影響不同,通過不同金屬離子對綠豆MDH的研究表明∶K+有激活作用;Mg2+和Ca2+對酶活影響不大;Zn2+、P2+和Cu2+對酶活有不同程度的抑制作用,其中Cu2+抑制程度最強,當(dāng)其濃度為1M時,97%的酶活被抑制。
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