在生化檢測過程中,生化試劑的相互干擾是影響檢測結(jié)果準確性的重要因素。深入了解試劑相互干擾的類型,并掌握有效的實驗排查方法,對于保障臨床診斷的可靠性是關(guān)鍵。
一、生化試劑相互干擾的類型
1、直接干擾:試劑中含有下一個檢測所要測定的底物,或是含有的某種試劑成分與下一反應的底物有作用,從而直接干擾下一反應的測定結(jié)果。在血糖檢測中,如果前一個檢測項目的試劑中殘留有葡萄糖,而后續(xù)檢測項目恰好是血糖測定,那么殘留的葡萄糖會直接參與血糖檢測反應,導致血糖測定結(jié)果偏高,嚴重影響檢測的準確性。這種直接干擾會使檢測結(jié)果偏離真實值,誤導臨床診斷。
2、間接干擾:該試劑所引導的反應對下一個項目的反應進程帶來間接的干擾。在有試劑污染的情況下,下一個測試所測定的是前后兩個項目反應的綜合作用結(jié)果。一些酶類試劑在反應過程中可能會改變反應體系的 pH 值、離子強度等條件,而這些變化可能會影響后續(xù)檢測項目中酶的活性或反應平衡,進而間接干擾檢測結(jié)果。免疫比濁法檢測中,前一個反應殘留的某些物質(zhì)可能會影響濁度的測定,使檢測結(jié)果出現(xiàn)偏差。
3、pH 值改變干擾:試劑中反應緩沖液之間因儀器攜帶污染而使下一反應的 pH 值改變,導致下一反應達不到最佳狀態(tài)。雙縮脲法測血清總蛋白時,反應在堿性(pH 值 8 - 9)條件下,蛋白肽鍵(—CONH)才能與堿性銅溶液作用生成紫色反應,從而準確測出血清蛋白的總量。若 pH<8 時,總蛋白測定結(jié)果偏低,這不僅直接影響球蛋白、白蛋白 / 球蛋白的結(jié)果,還可能導致對患者蛋白質(zhì)代謝情況的誤判。在酶活力測定中,酶在最適 pH 值時反應最快、靈敏度最高,但由于緩沖能力有限,儀器攜帶污染可能使酶促反應體系的 pH 值偏離最適范圍,導致酶促反應出現(xiàn)無效值,無法準確反映酶的真實活性。
二、干擾的排查和發(fā)現(xiàn)實驗
1、試劑作為樣本進行全套項目測定:將某一試劑作為樣本進行全套項目測定,通過考察結(jié)果的情況,能夠確定發(fā)生試劑交叉污染時造成直接干擾的項目。在實際操作中,對于雙試劑的 R1、R2 兩種都要進行此項測試,這樣在后續(xù)解決干擾問題時更具針對性。如果將某一試劑作為樣本進行全套項目測定后,發(fā)現(xiàn)血糖項目結(jié)果異常升高,且該試劑中恰好含有葡萄糖或能與血糖檢測試劑發(fā)生反應的物質(zhì),那么就可以初步判斷該試劑對血糖檢測存在直接干擾。通過這種方法,可以快速定位可能存在干擾的試劑與檢測項目之間的關(guān)系。
2、樣本添加試劑對比測定:將 1 份樣本分為兩份,一份加生理鹽水或其他適當?shù)南♂屢?,另一份加等量的試劑,同時測定并考察結(jié)果的變化,以此來確定可能發(fā)生試劑交叉污染時造成干擾的項目。在肝功能檢測中,將同一份血清樣本分為兩份,一份添加生理鹽水作為對照,另一份添加可能存在干擾的試劑,然后同時進行轉(zhuǎn)氨酶等項目的測定。若添加試劑的樣本轉(zhuǎn)氨酶測定結(jié)果與對照樣本相比出現(xiàn)明顯差異,且排除其他因素后,就可以推測該試劑對轉(zhuǎn)氨酶檢測存在干擾。這種對比測定的方法能夠直觀地觀察到試劑對樣本檢測結(jié)果的影響,有助于發(fā)現(xiàn)潛在的干擾情況。
3、特定項目先后測定及統(tǒng)計分析:當懷疑A項試劑對B項目存在干擾時,可以用樣本先單做B項目若干次;然后先做A項目,接著做B項目若干次。通過統(tǒng)計學分析,可以明確A試劑通過試劑針對B項目的干擾程度。在血脂檢測中,懷疑膽固醇檢測試劑對甘油三酯檢測存在干擾,先對一批樣本單獨進行甘油三酯檢測,記錄結(jié)果;然后對相同樣本先進行膽固醇檢測,再進行甘油三酯檢測,同樣記錄結(jié)果。運用統(tǒng)計學方法對兩次甘油三酯檢測結(jié)果進行分析,計算平均值、標準差等參數(shù),通過比較差異的顯著性,判斷膽固醇檢測試劑對甘油三酯檢測是否存在干擾以及干擾的程度大小。
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