顯色底物DA-67是生物體恒量組分分析檢測中的中間代謝物,它的CAS號為:115871-18-6,德晟生產(chǎn)的外觀是白色的粉末,值得注意的是它的儲存對溫度是有要求的,需要在2-10℃的條件下保存,所以在常溫情況下運輸?shù)脑?,需要放置冰袋并使用泡沫箱進行包裝。
DA-67的應用原理
DA-67與過氧化物酶配合使用時,可以展現(xiàn)出對過氧化氫的高敏銳度,它是一種水溶性氧化顯色試劑。相比傳統(tǒng)的顯色試劑來說,它不但具有吸光度低、靈敏度高的特點,更值得一提的是,相比其他的德晟顯色試劑DA-67的水溶性要好,以1 mmol/L以上的濃度,10毫克可溶于25毫升的水中。同時兼容了以上幾個優(yōu)點,需要用簡單的比色法就能較快的獲取結果,大大的加大了檢測效率,所以DA-67常用于生物成分樣本分析中。
二、DA64-DA67的使用說明
1.制備顯色溶液
① 把4.08 mg DA67和1 mL100 units/mL的過氧化物酶(POD)放到配置的的PIPES緩沖劑中溶解,定容溶液至100 mL(DA67 100 μmol/L溶液);
② 將上述制備的溶液3 mL與10 μL樣本溶液(H2O2:0~5 mmol/L)混合,37°C條件下培育5分鐘;
③ 用分光光度計檢測666 nm處的吸光度,以空白(用蒸餾水替換樣本溶液混合成的溶液)的吸光度差作為檢測值,用單獨制備的校準曲線確定樣本中的含量。
2.制備檢測POD活性的顯色溶液
① 把4.08 mg DA67和1 mL H2O2(2%)加到配置好的Mcllvaine緩沖液中溶解(PH值5.7),定容至100 mL;
② 將上述制備的溶液2 mL與2 mL樣本溶液(1 fmol~1 pmol/tube POD)在37°C下孵育;
③ 用分光光度計檢測666 nm處的吸光度,以減去空白的吸光度差作為檢測值,用另外制作的校準曲線即可確定樣本中的含量數(shù)值。