1. 基本性質(zhì)
吖啶類化合物應(yīng)用于化學(xué)發(fā)光檢測具有以下優(yōu)點:
① 背景發(fā)光低,信噪比高;
② 發(fā)光反應(yīng)干擾因素少;
③ 光釋放快速集中、發(fā)光效率高、發(fā)光強度大;
④ 易于與蛋白質(zhì)聯(lián)結(jié)且聯(lián)結(jié)后光子產(chǎn)率不減少;
⑤ 標(biāo)記物穩(wěn)定(在2-8℃下可保存數(shù)月之久)。
吖啶類化合物化學(xué)發(fā)光不需要催化劑,在有H2O2 的稀堿性溶液中即能發(fā)光?;衔锏陌l(fā)光為閃光型,加入發(fā)光啟動劑后一般0.5s 左右發(fā)射光強度達(dá)到zui大,半衰期為1s左右。
吖啶類化合物應(yīng)用于免疫分析(CLIA)。即用吖啶鹽標(biāo)記抗體或抗原,用HNO3+ H2O2 和NaOH 作發(fā)光啟動試劑。有些在發(fā)光啟動試劑中加入Triton X-100,CTAC,Tween-20等表面活性劑以增強發(fā)光。
吖啶類化合物常用于環(huán)境分析、免疫分析、酶活性分析和標(biāo)記寡核苷酸片段等,在臨床上用于測定細(xì)菌、病毒或其它疾病標(biāo)志物。
2. 吖啶酯DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS
或NSP-DMAE-NHS是一種理想的化學(xué)發(fā)光免疫分析標(biāo)記物質(zhì),具有良好的發(fā)光性能。與目前廣泛使用的吖啶酯AE-NHS相比,吖啶酯DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS與抗體(Ab)偶聯(lián)物的發(fā)光強度更高,吖啶酯DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS為1.03′107cps/ng,而AE-NHS為1.0′105cps/ng Ab,兩者的發(fā)光動力學(xué)性質(zhì)很相似,都為閃光型發(fā)光且都 是在0.4s時達(dá)到很高,但DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS的熱穩(wěn)定性較AE-NHS顯著提高,AE-NHS只在酸性溶液中穩(wěn)定,當(dāng)pH>6.3后易水解,而DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS則不然,如在室溫下,在pH為7.0的PB緩沖液中很穩(wěn)定,16天后,發(fā)光活性只降低3.6%。它們與蛋白偶聯(lián)物的發(fā)光熱穩(wěn)定性情況與此相似。
吖啶酯DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS易于標(biāo)記生物分子且標(biāo)記后化合物的發(fā)光活性及生物活性穩(wěn)定,以所合成的為發(fā)光標(biāo)記物應(yīng)用于化學(xué)發(fā)光免疫分析具有很高的靈敏度和其它理想的方法學(xué)指標(biāo),如對TSH的最低檢測限達(dá)0.007 mIμ/L。因此,吖啶酯DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS對于研究化學(xué)發(fā)光分析以及化學(xué)發(fā)光免疫分析均具有很好的應(yīng)用價值。
3. 吖啶磺酰胺NSP-SA-NHS
是一種非常有效的化學(xué)發(fā)光免疫分析標(biāo)記物質(zhì),它具有空間位阻大,水解穩(wěn)定性好,熱穩(wěn)定性和信噪比高等性質(zhì)。它的光量子產(chǎn)率也優(yōu)于吖啶酯AE-NHS。應(yīng)用于直接化學(xué)發(fā)光分析及化學(xué)發(fā)光免疫分析等具有許多優(yōu)點。
吖啶磺酰胺NSP-SA-NHS化學(xué)發(fā)光不需要催化劑,在有H2O2的稀堿性溶液中即能發(fā)光,具有許多優(yōu)越性,特別是無須一個催化過程,也不需要增強劑,從而降低了背景發(fā)光,提高了信噪比,干擾作用少。該類化合物作為化學(xué)發(fā)光免疫分析的發(fā)光標(biāo)記物,還具有其它方面的優(yōu)點,如光釋放快速集中、發(fā)光效率高、發(fā)光強度大,易于與蛋白質(zhì)聯(lián)結(jié)且聯(lián)結(jié)后光子產(chǎn)率不減少、標(biāo)記物穩(wěn)定,在2-8℃下可保存半年以上。
吖啶磺酰胺NSP-SA-NHS的穩(wěn)定性較吖啶酯類如AE-NHS高,其原因是由于C-N鍵與C-O鍵的鍵級不同,C-N鍵大于C-O鍵。吖啶酰胺類化合物抵抗水解的能力也強于吖啶酯類化合物。