三羥甲基氨基甲烷緩沖液,即Tris緩沖液,通常搭配鹽酸來調(diào)節(jié)pH值配制緩沖劑,也有的是用醋酸、硼酸、甘氨酸等其它酸調(diào)節(jié),而很多其它種類的緩沖劑如Bicine、MOPS、HEPES、CAPS等都是用氫氧化鈉堿液來調(diào)節(jié)pH,這是Tris緩沖液的獨(dú)特之處。
基礎(chǔ)性質(zhì)
Tris在室溫(25℃下,它的pKa為8.1;根據(jù)緩沖理論,Tris緩沖液的有效緩沖范圍在pH7.0到9.2之間。 Tris水溶液pH在10.5左右,一般加入鹽酸以調(diào)節(jié)pH值至所需值,即可獲得該pH值的緩沖液。Tris的pKa受溫度影響較大,從而會(huì)導(dǎo)致pH值的改變,需要注意溫度的影響。
Tris緩沖液的特點(diǎn)
三羥甲基氨基甲烷本身是一種弱堿,水溶液顯堿性,因此配制緩沖液時(shí)使用鹽酸來調(diào)節(jié)而不是用氫氧化鈉。Tris分子結(jié)構(gòu)中含有一個(gè)氨基,可以與醛發(fā)生縮合反應(yīng),因此在含有醛的體系中,使用Tris緩沖劑可能會(huì)受到影響。
Tris緩沖液適合核酸相關(guān)實(shí)驗(yàn)
Tris緩沖液通常是中性偏弱堿性,DNA核酸分子在這樣的溶液中會(huì)被去質(zhì)子化,從而提高溶解度。因此Tris可作為核酸的良好溶劑(也適合作蛋白的溶劑),在核酸相關(guān)的實(shí)驗(yàn)中,優(yōu)先考慮使用Tris作為緩沖劑。在Tris鹽酸鹽緩沖液中還經(jīng)常加入EDTA,制成TE緩沖液,可抑制核酸酶,抑制核酸的降解,提高核酸穩(wěn)定性。在電泳緩沖液中經(jīng)常用醋酸或硼酸來代替鹽酸,比如用于核酸電泳實(shí)驗(yàn)的TAE緩沖液及TBE緩沖液。
除了核酸相關(guān)實(shí)驗(yàn),Tris也經(jīng)常用于蛋白質(zhì)相關(guān)的實(shí)驗(yàn),比如不同pH條件下蛋白質(zhì)的生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)采用Tris作為緩沖劑。由于Tris緩沖液不含金屬離子,離子強(qiáng)度低的特點(diǎn),還可以用于線蟲核纖層蛋白的中間纖維的形成。德晟是生產(chǎn)廠家,可提供噸級(jí)以上的Tris供應(yīng)。