腫瘤是危及人們生命的"殺手"之一,因此及早的發(fā)現(xiàn)和治療是非常重要的,但由于腫瘤早期的癥狀不是很明顯,容易出現(xiàn)誤診和漏診等問題。通常在腫瘤發(fā)生的4-8周前,血清或體液中的對氧磷酶的活性會顯著增加或減少,因此,測定體液中的對氧磷酶(PON)的活性是診斷腫瘤的重要手段之一。
測定對氧磷酶活性的方法有多種,但由于干擾因素和靈敏度的問題,能用于體液樣品的測定方法卻很少。目前文獻多以紫外吸收光譜法測定酶的活性,該方法簡單,但背景噪音大,并且生物體是一個極其復雜的體系,酶提取液中含有的其它吸光成分較多,紫外-可見分光光度法測定專一性不強,靈敏度也不高。
而不需要光源,背景噪音小,干擾少,測量時靈敏度高,用于測定酶的活性不需要對具有紫外吸收的于擾物進行分離。在本論文中,合成了三個吖啶酯類底物,以9-(4-對氯苯氧羰基)-10-甲基吖啶三氟甲基磺酸鹽(CPOCMA)為研究對象,采用化學發(fā)光法來測定血清中對氧磷酶的活性。
吖啶酯類發(fā)光底物的化學發(fā)光屬于瞬間發(fā)光,整個發(fā)光過程在20s內(nèi)即可完成;引發(fā)劑可以影響發(fā)光強度,當在0.1%H2O2與0.025mol/LHNO3和1.0mol/LNaOH與1.0×103mol/LCTAB的情況下,吖啶酯類底物的發(fā)光強度最大;吖啶酯類底物儲存在2℃和25℃時,隨著溶液的pH(6,7,8)的增大,試劑的穩(wěn)定性變差。
通過對吖啶酯類發(fā)光底物性能的研究,將其應用于血清中PON的測定,對底物的特異性、方法的可靠性進行了研究。研究發(fā)現(xiàn)吖啶酯類發(fā)光底物具有高效的化學發(fā)光效率,其濃度比紫外法測定PON活性的底物乙酰苯酯和二嗪農(nóng)的濃度至少低1.0×10°倍,且用量少,成本低。此外,化學發(fā)光法測定PON的活性在生理的pH下就可完成。