如何選擇緩沖區(qū)

選擇緩沖區(qū)時(shí)，重要的是要考慮每個(gè)緩沖區(qū)的優(yōu)缺點(diǎn)。首先，您計(jì)劃在實(shí)驗(yàn)中使用的試劑的pH范圍必須與您選擇的緩沖液的pH范圍一致。其次，您必須考慮濃度，緩沖液毒性，溫度和反應(yīng)性。緩沖液的濃度必須足以說明您計(jì)劃在實(shí)驗(yàn)中使用的酸或堿的量。您計(jì)劃使用的pH改變成分越多，所需的緩沖液濃度就越高。緩沖液毒性非常重要，因?yàn)槟承┚彌_液可能會(huì)對(duì)正在使用的細(xì)胞產(chǎn)生毒性，因此，如果不確定毒性，可以在實(shí)驗(yàn)中使用緩沖液之前先對(duì)細(xì)胞進(jìn)行測(cè)試。您還應(yīng)確保決定使用的緩沖液不會(huì)在實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生不需要的反應(yīng)。

Tris和Tris HCl溶液

可用于包括TAE和TBE在內(nèi)的各種緩沖溶液中。例如用于SDS-PAGE。其有效pH范圍是7.0至9.0。Tris緩沖液的兩種常見形式是Tris堿和Tris HCl。調(diào)節(jié)Tris堿的pH值可能是一個(gè)挑戰(zhàn)，但是使用Tris HCl而不是通過添加NaOH或HCl來調(diào)節(jié)pH可以簡(jiǎn)化此過程。使用Tris HCl替代NaOH或HCl的其他優(yōu)點(diǎn)包括安全性和可重復(fù)性。

注意事項(xiàng)：

使用Tris溶液的一個(gè)技巧是溶液的pH值非常依賴于溫度。因此，應(yīng)在使用緩沖液的溫度下制備Tris。此外，應(yīng)避免使用含Tris緩沖液的含銀單結(jié)pH電極。

HEPES是兩性離子Good's緩沖液，在6.8至8.2的pH范圍內(nèi)有效。這使HEPES在生理pH值下成為有效的緩沖液。該緩沖液可用于多種生物的細(xì)胞培養(yǎng)基中。它也可用作蛋白質(zhì)研究中的結(jié)合緩沖液，用于陽離子交換洗脫實(shí)驗(yàn)中，以及在凝膠電泳中用作運(yùn)行緩沖液。

注意事項(xiàng)：

HEPES可溶于水，并且通常具有生物惰性。然而，它確實(shí)參與了產(chǎn)生自由基的氧化還原反應(yīng)，并干擾了DNA與限制酶之間的反應(yīng)，但是由于空間位阻，其干擾程度小于Tris。同樣重要的是要注意，當(dāng)使用異質(zhì)連接蛋白通道時(shí)，不應(yīng)使用HEPES，因?yàn)樗鼤?huì)抑制其功能。如果要進(jìn)行毒性研究，請(qǐng)選擇HEPES鈉鹽而不是游離酸。

PIPES是哌嗪緩沖液家族的一員，與HEPES屬于同一家族。它是兩性離子Good's緩沖液，在6.1至7.5的pH范圍內(nèi)有效。由于pH范圍與HEPES略有不同，PIPES的濃度僅為HEPES濃度的一半。該緩沖劑不會(huì)與金屬絡(luò)合，因此可用于含金屬離子的溶液。它也可以用于色譜分析，電子顯微鏡固定植物細(xì)胞，以及代替草甘膦緩沖液。

注意事項(xiàng)：

直到溶液的pH值升高到6.5以上時(shí)，PIPES的游離酸才容易溶解，但是PIPES的鈉鹽很容易溶解。如果使用的是游離酸形式的緩沖液，請(qǐng)使用氫氧化鈉將其轉(zhuǎn)化為鈉鹽，以提高在較低pH下的溶解度。像HEPES一樣，PIPES不適用于涉及氧化還原反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)，因?yàn)樗鼤?huì)導(dǎo)致自由基的形成。