法CLIA和實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)都是病毒檢測(cè)中常用的方法,不同的檢測(cè)方法得出的檢測(cè)結(jié)果可能會(huì)有一定的差異,下文將兩種方法檢測(cè)肝癌患者血清的結(jié)果作對(duì)比。
化學(xué)發(fā)光法CLIA:
化學(xué)發(fā)光免疫分析就是將免疫反應(yīng)和化學(xué)發(fā)光反應(yīng)相結(jié)合,藉以檢測(cè)抗原或抗體的技術(shù)。常用的發(fā)光物質(zhì)或發(fā)光試劑有吖啶酯和魯米諾等,將發(fā)光物質(zhì)或酶標(biāo)記在抗原或抗體上,免疫反應(yīng)結(jié)束后,加入氧化劑或酶底物而發(fā)光,通過測(cè)量發(fā)射光強(qiáng)度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定待測(cè)物的濃度。
化學(xué)發(fā)光與qPCR檢在肝癌診斷中的對(duì)比
qPCR法:
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中,以熒光化學(xué)物質(zhì)測(cè)每次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法,通過內(nèi)參或者外參法對(duì)待測(cè)樣品中的特定DNA序列進(jìn)行定量分析。PCR擴(kuò)增過程中,通過熒光信號(hào),對(duì)PCR進(jìn)程進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)。由于在PCR擴(kuò)增的指數(shù)時(shí)期,模板的Ct值和該模板的起始拷貝數(shù)存在線性關(guān)系,所以成為定量的依據(jù)。
分析化學(xué)發(fā)光法和實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)肝癌患者血清中的EB病毒載量,探討EB病毒在肝癌檢測(cè)中的意義。
以化學(xué)發(fā)光法和qPCR對(duì)正常對(duì)照組、乙肝組、丙肝組及肝癌組患者血清中的EB病毒載量進(jìn)行檢測(cè),并將兩種檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析。對(duì)比結(jié)果 :
化學(xué)發(fā)光檢測(cè)肝癌組患者EB表達(dá)水平為1.99,均顯著高于乙肝(1.25,u=5.129,P<0.05)、丙肝(1.31,u =4.497,P<0.05)、正常組(0.03,u=10.927,P<0.05);實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)肝癌組患者的EB表達(dá)水平為1.89,高于乙肝(1.26,u=5.295,P<0.05)、丙肝(1.32,u=4.983,P<0.05)及正常組(0.04,u=11.394,P<0.05),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
肝癌患者術(shù)前EB表達(dá)水平(化學(xué)發(fā)光:1.87;實(shí)時(shí)熒光定量PCR:1.85)明顯高于術(shù)后(化學(xué)發(fā)光:0.03,u=12.873,P<0.05);實(shí)時(shí)熒光定量PCR:0.04,u =11.936,P<0.05),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩種檢測(cè)方法結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
結(jié)論:化學(xué)發(fā)光法和熒光定量PCR具有特異性強(qiáng)、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn),都可以用于檢測(cè)肝癌的早期診斷和分期。其中德晟的研發(fā)方向是以魯米諾、吖啶酯作為發(fā)光試劑的化學(xué)發(fā)光免疫分析。