作為生物緩沖劑家族中的中流砥柱,是合成Bis-Tris,TES,TAPS中是必不可少的反應(yīng)物。后面幾種均為生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常使用的緩沖劑,他們結(jié)構(gòu)中都含有Tris的分子結(jié)構(gòu)。下面我們來(lái)列舉tris和以他合成的Bis-Tris這兩種常用化學(xué)物質(zhì)的應(yīng)用場(chǎng)景,淺析它的優(yōu)越化學(xué)性能。
三羥甲基氨基甲烷(行業(yè)常稱作Tris),25°C下其pKa為8.04,緩沖范圍7.0~9.0。其常用實(shí)驗(yàn)如下:
(1)常用于凝膠電泳緩沖液中,例如TAE或TBE;
(2)常用于制備Laemmli緩沖液;
(3)常與甘氨酸和SDS一起制備運(yùn)行緩沖液和上樣緩沖液;
(4)可以用作陰離子交換層析中的結(jié)合緩沖液和洗脫液;
(5)被用作RNA雜交和DNA裂解的緩沖液。
在Tris的使用中,需要注意:Tris緩沖液的pH值受溫度和濃度影響很大,我們?cè)谂渲七^(guò)程中要特別注意應(yīng)用環(huán)境的影響因素;Tris的伯胺基在特定條件上與多種分子發(fā)生反應(yīng),包括RNA抑制劑,常見(jiàn)金屬如Ag+,Co2+和Cu2+等,酶,Tris不適合喹啉甲酸測(cè)定。
Bis-Tris,雙(2-羥乙基)氨基(三羥甲基)甲烷,兩性陰陽(yáng)離子緩沖劑,25°C下pKa為6.46,pH緩沖能力范圍為5.2~7.8。其應(yīng)用領(lǐng)域如下:
(1)作為各種類型電泳的樣品緩沖液,凝膠緩沖液和儲(chǔ)存保質(zhì)緩沖液;
(2)作為陰離子交換色譜法中的緩沖液;
(3)被用于鹵代烷烴脫鹵酶結(jié)晶過(guò)程的X射線晶體學(xué)研究;
(4)低導(dǎo)電性和高靈敏度,是核磁共振光譜的有效緩沖液;
(5)與人肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白(FAB)相互作用并影響蛋白質(zhì)動(dòng)力學(xué)。
Bis-Tris與Fe3+和Cr3+形成絡(luò)合物,與許多常見(jiàn)金屬形成絡(luò)合弱復(fù)合物,因此在含有金屬離子的溶液中使用時(shí),應(yīng)考慮其絡(luò)合因子的范圍。此外,在有系統(tǒng)壓力變化的反應(yīng)釜,可使用Bis-Tris緩沖溶液。Bis-Tris是二甲基胂酸鹽的替用品以避免其高毒性,但同樣不喹啉甲酸測(cè)定。
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