疫情爆發(fā)以來，相關(guān)診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)企業(yè)第一時間推出了RT-PCR法的核酸檢測試劑盒，通過采集口咽拭子或鼻咽拭子樣本，提取純化病毒的RNA，定性或定量檢測“2019-新冠病毒”。這種方法所使用的樣本采集與保存容器為“一次性使用病毒采樣管”。新冠病毒核酸檢測，一次性病毒采樣管可謂是功不可沒。下面德晟為擬介紹下病毒采樣管的構(gòu)成與使用吧。

關(guān)于病毒采樣管的組成與生產(chǎn)制造：

1、采樣拭子：采樣拭子直接接觸采樣部位，其采樣頭的材質(zhì)與后續(xù)的檢測關(guān)系密切。采樣拭子頭應(yīng)該采用Polyester(PE)合成纖維或Rayon(人造纖維)制成，不能使用海藻酸鈣海綿或木棒拭子(包括竹簽)，拭子頭部的材料也不能為棉花制品，因為棉花的纖維對蛋白質(zhì)的吸附較強，不易洗脫到后續(xù)的保存液中；而含有海藻酸鈣和木制成分的木棒或竹簽折斷后浸泡在保存液中也會吸附蛋白，甚至會對后續(xù)的PCR反應(yīng)有抑制作用。

制造拭子頭的材料推薦使用PE纖維、聚酯纖維、聚丙烯纖維等合成纖維，不推薦棉花等天然纖維，也不推薦尼龍類的纖維，因為尼龍類纖維(類似于牙刷刷頭)吸水性不佳，導(dǎo)致采樣量不足，影響檢出率。

2、病毒保存液：市場上廣泛使用的病毒保存液主要有兩種，一種是以運送培養(yǎng)基為基礎(chǔ)改良的病毒維持液，另一種則為核酸提取裂解液改良的保存液。

前者的主要成分是Eagle's基礎(chǔ)培養(yǎng)液(MEM)或Hank's平衡鹽，添加了病毒生存所需的鹽類、氨基酸、維生素、葡萄糖以及蛋白質(zhì)，這種保存液使用酚紅鈉鹽做為指示劑，溶液pH值在6.6-8.0時溶液呈粉紅色。保存液中添加了必須的葡萄糖、L-谷氨酰胺和蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)的提供形式有胎牛血清或牛血清白蛋白，可以穩(wěn)定病毒的蛋白質(zhì)外殼。

由于保存液營養(yǎng)成分豐富，有利于病毒的成活但是也有利于細菌的生長，如果保存液中污染了細菌，則會大量繁殖，其代謝產(chǎn)物中的二氧化碳會使保存液pH值下降，從粉紅色變?yōu)辄S色。因而大多數(shù)廠家都在配方中添加了抑菌劑成分，推薦使用的抑菌劑為青霉素、鏈霉素、慶大霉素及多粘菌素B等，不推薦使用疊氮鈉、2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮(MCI)和 5-氯-2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮(CMCI)等抑制劑，因為這些組分對PCR反應(yīng)有影響。由于這種保存液提供的樣本基本是活病毒，可以最大程度保持樣本的原始性，后續(xù)不僅可以用于病毒的核酸提取檢測，還能用于病毒的培養(yǎng)和分離。但是用于檢測時應(yīng)該注意的是必須滅活以后再進行核酸提取純化。

另一種以核酸提取裂解液為基礎(chǔ)配制的保存液，主要成分為平衡鹽類、EDTA螯合劑、胍鹽(如異硫氰酸胍、鹽酸胍等)、陰離子表面活性劑(如十二烷基硫酸鈉)、陽離子表面活性劑(如十四烷基三甲基草酸銨)、苯酚、8-羥基喹啉、二硫蘇糖醇(DTT)、蛋白酶K等幾種或多種組分，這種保存液是直接裂解病毒釋放核酸，消除核酸分解酶(RNase)，如果僅用于RT-PCR較為合適，但裂解液可以滅活病毒，這種樣本不能用于病毒的培養(yǎng)分離。

病毒保存液使用的金屬離子螯合劑推薦使用EDTA鹽類(如乙二胺四乙酸二鉀、乙二胺四乙酸二鈉等)，不推薦使用肝素類(如肝素鈉、肝素鋰)，以免影響PCR檢測。

3、保存管：制造保存管的材質(zhì)應(yīng)注意選擇，有資料提示聚丙烯(Polypropylene)與核酸的吸附有關(guān)，特別是在高張力離子濃度時，聚乙烯塑料(Polyethylene)比聚丙烯(Polypropylene)更容易抓住DNA/RNA。聚乙烯-丙烯聚合物(Polyallomer)塑膠與某些特殊處理的聚丙烯(Polypropylene)塑膠容器更適合做DNA/RNA的儲存使用。另外，在使用可折斷拭子時，保存管應(yīng)盡量選擇高度大于8厘米的容器，以防止在折斷拭子時內(nèi)容物外濺污染。

關(guān)于病毒采樣管的使用：

使用病毒采樣管取樣主要分為口咽取樣和鼻咽取樣：

1、口咽取樣：先用壓舌板壓住舌頭，然后將采樣拭子頭部伸入咽喉部位擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，輕度用力拭抹咽后壁部位，應(yīng)避免觸及舌部。

2、鼻咽取樣：以拭子測量鼻尖到耳垂的距離并用手指做標記，將采樣拭子以垂直鼻子(面部)方向插入鼻腔，拭子伸入距離最少應(yīng)達耳垂部位到鼻尖長度的一半，使拭子在鼻內(nèi)停留15-30秒，輕輕旋轉(zhuǎn)3-5次，抽出拭子。

從使用方法不難看出，不管是口咽拭子還是鼻咽拭子，采樣都是一個技術(shù)活，難度高、易污染，采集樣品的質(zhì)量直接關(guān)系到后續(xù)的檢測，如果采集的樣本病毒載量低，容易造成假陰性，難以確診。